赭曲霉毒素(Ochratoxins)是赭曲由曲霉属和青霉属的几个种产生的有毒代谢产物。在寒冷的霉毒气候下,产毒霉菌主要是标准纯绿青霉(P.uiridicatum),而在温暖的检测气候下,产毒霉菌主要是赭曲赭曲霉(A.ochracatum)。赭曲霉毒素的霉毒基本化学结构是由异香豆素连接到p-苯基丙氨酸上的衍生物,有A、标准B、检测C、赭曲D四种化合物。霉毒赭曲霉毒素A(0chratoxin A.缩写OTA)的标准化学结构式为: 赭曲霉毒素B的分子结构中没有氯元素,赭曲霉毒素c是检测赭曲霉:荤素A的乙酯,赭曲霉毒素D是赭曲4-羟基赭曲霉毒素A。从对谷物的霉毒污染率、污染水平及对人畜的标准毒性考虑,OTA是重要的有卫生学意义的霉菌代谢产物。OTA是稳定的无色结晶化合物,溶于极性溶剂和稀碳酸氢钠溶液,微溶于水。将0TA的乙醇溶液贮于冰箱中一年以上也无损失,但应避光保存,如接触紫外线,几天就会分解。 OTA主要污染谷物和大豆,在动物饲料中OTA的污染率和污染水平远远超过供人食用的粮食。动物食用污染OTA的饲料,OTA蓄积于动物体内,在动物的肾、肝、肌肉和血液中都能检出OTA,人也可通过食用动物组织摄入OTA。OTA对实验动物的毒性主要表现为肾脏毒和肝脏毒,并有致畸和致癌作用。由OTA引起的天然发生的霉菌毒素病有丹麦和瑞典猪的霉菌毒素肾病,OTA也可能是巴尔干地区流行的人的地方性肾病的病因。世界粮农组织和世界卫生组织食品添加剂联合专家委员会在第37次(1991年)报告中对OTA的毒性进行了评价,认为猪是最敏感的动物,肾是OTA作用的主要靶器官。应用对猪进行90d喂养试验的结果,评价人的OTA允许摄入量,用最低有作用水平每天0.0008 mg/kg体重和500倍的安全系数,在此基础上建立了每星期112μg/kg体重的暂时允许摄入量。我国还没有制定出OTA的卫生标准。据文献报导,食品(包括谷物、动物组织)中OTA的检测方法有薄层色谱法、高效液相色谱法和酶联免疫吸附测定法。 一、薄层色谱法 (一)适用范围 本方法适用于小麦、玉米和大豆中OTA的测定。 (二)原理 用三氯甲烷-0.1mol/L磷酸或石油醚-甲醇/水提取样品中的OTA,样品提取液经液-液分配后,根据其在波长365nm紫外光灯下产生黄绿色荧光,在薄层色谱板上与标准比较测定含量。 (三)试剂 以下试剂除特殊规定外均为分析纯试剂,水为蒸馏水或同等纯度的水。 1、石油醚(60~900C或30~60℃); 2、甲醇; 3、三氯甲烷; 4、甲苯; 5、乙酸乙酯; 6、甲酸; 7、冰乙酸; 8、乙醚; 9、苯-乙腈(98+2); 10、0.1mol/L磷酸[c(H3PO4)=0.1mol/L]:称取11.5g磷酸(85%磷酸),加水稀释至1000mL; 11、2mol/L盐酸溶液[c(HCl)=2mol/L]:量取20mL盐酸,加水稀释至120mL; 12、4%氯化钠溶液; 13、0.1mol/L碳酸氢钠溶液[c(NaHCO3)=0.1mol/L]:称取8.4g碳酸氢钠,加适量水溶解,并用水稀释至1000mL; 14、硅胶G; 15、赭曲霉毒素A标准溶液:用苯-冰乙酸(99+1)配成40μg/mLOTA贮备液,并用紫外分光光度计测定其浓度。最大吸收峰波长333nm,分子量403,摩尔消光系数值为5550)。精密吸取贮备液,用苯稀释成每毫升含OTAO.5μg。OTA标准溶液应置冰箱中避光保存。 (四)仪器 所有玻璃仪器均需用稀盐酸浸泡,依次用自来水、蒸馏水冲洗。 1、小型粉碎机; 2、电动振荡器; 3、玻璃板:5cm×20cm; 4、薄层涂布器:0.3mm; 5、展开槽:内长25cm,宽6cm,高4cm; 6、紫外光灯:波长365nm; 7、微量注射器:10μL,50μL; 8、具O.2mL尾管的10mL小浓缩瓶。 (五)操作步骤 1、样品溶液的制备 甲法:称取20g粉碎并通过20目筛的样品,置于200mL具塞锥形瓶中,加入10O mL三氯甲烷和10mL O.1mol/L磷酸,振荡30min后通过快速定性滤纸过滤。取20mL滤液置于250mL分液漏斗中,加50mL,0.1mol/L碳酸氢钠溶液振摇2min,静置分层后,将三氯甲烷层放入另一个100mL分液漏斗中(少量乳化层或即使三氯甲烷层全部乳化都可放入分液漏斗中),加入50 mL0.1mol/L碳酸氢钠溶液,重复提取三氯甲烷层,静置分层后弃去三氯甲烷层(如三氯甲烷层仍乳化,弃去,不影响结果)。碳酸氢钠水层并入第一个分液漏斗中,加约5.5 mL2 mol/L盐酸溶液调节pH2~3(用pH试纸测试),加入25mL三氯甲烷振摇2min,静置分层后,放三氯甲烷层于另一盛有100mL水的250mL分液漏斗中,酸水层再用10mL三氯甲烷振摇提取、静置,将三氯甲烷层并入同一分液漏斗中,振摇、静置分层,用脱脂棉擦干分液漏斗下端,放三氯甲烷层于一75mL蒸发皿中,将蒸发皿置蒸气浴上通风挥干,用约8mL三氯甲烷分次将蒸发皿中的残渣溶解,转入具尾管的10mL浓缩瓶中,置80tC水溶锅上用蒸气加热吹氮气浓缩至干,加入0.2mL苯-乙腈(98+2)溶解残渣,摇匀,供薄层色谱点样用。 乙法:称取20g粉碎并通过20目筛的样品,加于200mL具塞锥形瓶中,加30mL石油醚和100mL甲醇-水(55+45),在瓶塞上抹一层水盖严防漏。振荡30min后,通过快速定性滤纸滤入分液漏斗中,待下层甲醇水层分清后,取出20mL滤液,置于100mL分液漏斗中,用pH试纸测试,一般为5~6。加入25mL三氯甲烷振摇2min,静置分层后放出三氯甲烷层于另一个分液漏斗中,再用10mL三氯甲烷重复振摇提取甲醇水层(在用三氯甲烷振摇提取时,如发生乳化现象,可滴加甲醇促使其分层),将三氯甲烷层合并于同一分液漏斗中,加入50~100mL4%氯化钠溶液(加入量视品种不同而异,大豆加100mL,小麦、玉米则加50mL左右),振摇放置(如为大豆样品,还须轻轻反复倒转分液漏斗,使乳化层逐渐上升。如乳化严重,可加入少许甲醇),待三氯甲烷层澄清后,用脱脂棉擦干分液漏斗下端,放三氯甲烷层于75mL蒸发皿中(如为大豆样品,须再加入10mL三氯甲烷振摇,三氯甲烷层合并于同一蒸发皿中),将蒸发皿置蒸气浴上通风挥干。以下操作自“用约8mL三氯甲烷分次将蒸发皿中的残渣溶解”起,按甲法操作。 参考资料:食品卫生微生物检验标准手册 相关链接:赭曲霉毒素A,赭曲霉毒素B,微量注射器 |
药食同源养生理念升温 将向母婴渠道靠拢汽车行驶时前挡风玻璃开裂怎么办 更换前挡风玻璃有什么注意事项,行业资讯基差和价差给予玻璃1809较强预期,行业资讯玻璃隔热保温涂料效果怎么样 玻璃隔热涂料是什么,行业资讯贴在家里玻璃上的贴纸怎么弄掉 玻璃隔断磨砂纸怎么贴,行业资讯备孕家庭经验分享与硼酸胶囊正确选择购买指南卧室和客厅做玻璃隔断怎样设计好看 卧室和客厅玻璃隔断墙怎么设计好,行业资讯什么是光伏玻璃 光伏玻璃的前景,行业资讯真空玻璃多少钱一平方 隔音玻璃多少钱一平方 ,行业资讯河北将压减退出钢铁产能4000万吨,行业资讯甲醇中邻苯二甲酸二丁酯(DBP)溶液标准物质:确保分析准确性孕前饮食记录多久消失一点丁香妈妈app备孕在哪苹果为什么选择蓝宝石玻璃 屏幕有蓝宝石玻璃吗,行业资讯世界鱼粉和鱼油的产量比2020年5月增加了50%,市场继续增长现在的塑钢门窗成本要多少钱 钢架玻璃房50平造价多少,行业资讯告别假期的悠闲 活力开启校园新穿搭北京石景山:加强燃气安全专项检查山东宁阳发布食品安全“红黑榜” 食品安全“晒”出来食品接触聚乳酸杯盖中的滑石粉迁移分析(二)双层玻璃主要用于隔热吗 如何使双层玻璃的隔音和隔热效果更好,行业资讯高纯水:超净品质,满足高端科研与分析需求沙河报价上涨,其他地区跟进!,行业资讯俄罗斯农业部:俄增加蔬菜种植有助于维持物价稳定贴上“绿色食品”标识 普通鸡蛋售价能翻倍?浙江杭州查处一起侵犯亚运会特殊标志知识产权案件江西严守特种设备安全底线广东省整治“散乱污”工业企业,9月26日起集中整治一年,行业资讯上身JORDAN SNEAKER SCHOOL系列 大显身手沙河报价上涨,实际成交尚可!,行业资讯男性备孕要买什么保险阳光房用玻璃如何挑选 阳光房屋顶用什么玻璃好,行业资讯解锁童趣 让宝贝们在春日里自由绽放新型油砂无手印玻璃的效果如何 油砂无手印蒙砂粉与普通蒙砂粉的区别,行业资讯安徽“个转企”办理时限压缩至一日橱柜玻璃门是怎么做的 厨柜门用玻璃门好吗,行业资讯蒂孩儿春季上新 复古时尚 个性彰显孕前饮食清淡素菜做法窍门2018年中国光伏市场需求预计缩减4成,行业资讯推进质量强国建设∣湖北:为万家企业送去“质量课”